Jan 20, 2025

Public workspaceCambio de medio

DOI
dx.doi.org/10.17504/protocols.io.yxmvm9qk9l3p/v1
  • 1Universidad Católica San Antonio (UCAM)
  • UCAM HITECH
Judit Garcia
Icon indicating open access to content
QR code linking to this content
DOI: dx.doi.org/10.17504/protocols.io.yxmvm9qk9l3p/v1
Protocol Citation: Judit Garcia 2025. Cambio de medio. protocols.io https://dx.doi.org/10.17504/protocols.io.yxmvm9qk9l3p/v1
License: This is an open access protocol distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License,  which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original author and source are credited
Protocol status: Working
We use this protocol and it's working
Created: January 20, 2025
Last Modified: January 20, 2025
Protocol Integer ID: 118736
Abstract
Reemplazar el medio agotado por uno fresco para mantener las células en condiciones óptimas. Esto es necesario para eliminar desechos metabólicos, renovar nutrientes y mantener el pH adecuado del cultivo.
Guidelines
Gestión de residuos:
ABCD
Tipo de residuoEnvaseEtiquetaEjemplos
Sólidos no punzantes (L.E.R. 180103)Contenedor negro con etiqueta de residuo biológico (situado al lado de la campana). Pictograma peligro biológico.Frascos de cultivo.Pipetas serológicas y puntas.Pipetas de vidrio.Tubos.Cualquier material que haya entrado en contacto con restos no inactivados.Recipientes de los reactivos.
Sólidos punzantes (L.E.R. 180103)Contenedor amarillo.Etiqueta en el envase.Pipetas de vidrio.
Líquidos → residuos sanitarios (L.E.R. 180103)Podrán verterse al desagüe habiendo añadido previamente un 10% de lejía durante al menos 20 minutos. Sin etiqueta.Restos del aspirador en el matraz.

Materials
Materiales y equipamientos:
  • Cabina de bioseguridad II
  • Baño termostático
  • Rollo de papel
  • Frasco con células en cultivo adherente
  • Aspirador con salida en un matraz erlenmeyer con lejía
  • Puntas de vidrio para el aspirador
  • Pipetas graduadas
  • Auxiliar de pipeteo

Reactivos:
  • Etanol al 70% (preferiblemente en una botella tipo spray)
  • PBS a 37ºC (dejar en el baño termostático al menos 10 minutos)
  • DMEM a 37ºC (dejar en el baño termostático al menos 10 minutos)
Safety warnings
Pictogramas de seguridad




Before start
EPIs y equipos de seguridad
  • Bata (con puño preferiblemente)
  • Guantes
  • Manguitos
  • Mascarilla (recomendable)
  • Gafas de seguridad (recomendable)
  • Cabina de seguridad biológica tipo II

Encender la cabina y poner la luz UV durante al menos 10 minutos.
Apagar la luz UV y desinfectar la cabina con etanol al 70%.
Introducir todo el material necesario en la cabina, desinfectándolo con etanol al 70%.
Retirar el medio del frasco mediante aspiración.
Pipetear 8 mL (frasco de 75) o 5mL (frasco de 25) de PBS al frasco y posteriormente aspirar (para lavar el frasco).
Añadir 8 mL (frasco de 75) o 5mL (frasco de 25) de DMEM, anotar en el frasco la fecha a la que se le realizó el cambio de medio.
Una vez finalizado el proceso, guardamos los frascos de cultivo en el incubador. Limpiamos y recogemos toda la zona de trabajo y los materiales empleados, además desechamos los residuos en su contenedor correspondiente.
Al finalizar el trabajo la campana debe limpiarse con etanol al 70% y encender la luz UV al menos 10 minutos.